Kit para determinação qualitativa do antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBsAg),por método imunocromatográfico,usando anticorpos mono e policlonais imobilizados na membrana para identificação seletiva de HBsAg em amostras de soro.

IMPORTÂNCIA CLÍNICA

A hepatite B é definida como inflamação do fígado causada por uma infecção pelo vírus da hepatite B (HBV), um vírus DNA, da família Hepadnaviridae. A partícula de Dane, tem uma estrutura complexa, com duplo envoltório.O envoltório externo contém proteínas antigênicas denominadas de antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBsAg)
e o interno, junto com o DNA e uma enzima (DNA-polimerase), constitui o core. Este, por sua vez, apresenta o antígeno de centro estrutural (HBcAg) e um antígeno solúvel (HBeAg).A infecção pelo HBV ocorre principalmente através de contato sexual, oral, parenteral e uso comum de seringas e agulhas. A transmissão sexual ocorre mais freqüentemente com o vírus das hepatites tipos A, B, C e Delta. Os tipos B e C podem evoluir para doença hepática crônica, e têm sido associados com carcinoma hepatocelular primário.No Brasil, estudos de prevalência do HBV detectaram índice de infecção média de 8,0% na região Amazônia legal, de 2,5% na região Sudeste e de 1,0% na região Sul.O período de incubação da hepatite B aguda situa-se entre 45 e 180 dias. Nos pacientes sintomáticos, a hepatite B usualmente evolui para fases prodrômica, ictérica e de convalescença. A hepatite B pode evoluir cronicamente, de forma persistente ou ativa, o que se demonstra pelos marcadores laboratoriais, testes de função hepática e histologia anormais.O diagnóstico laboratorial é realizado por meio dos marcadores sorológicos do vírus da hepatite B. O antígeno de superfície da hepatite B (HBsAg) é o primeiro marcador a aparecer, geralmente precede a hepatite clinicamente evidente, e também está presente no portador crônico. Por outro lado, o anticorpo superficial da hepatite B (Anti-HBs) pode aparecer tardiamente na fase convalescente e sua presença indica imunidade. A concentração de HBsAg em pacientes crônicos raramente apresenta-se menor que 20UI/ml.O é um teste para determinação qualitativa da presença de HBsAg em soro, que utiliza uma combinação de anticorpos monoclonais e policlonais para detecção seletiva de níveis elevados de HBsAg.Os antígenos de superfície HBsAg presentes na amostra ligam-se no conjugado gamaglobulina-corante formando um complexo antígeno-anticorpo. Este flui pela área absorvente da placa-teste indo se ligar aos anticorpos anti-HBsAg na área da reação positiva (T), determinando o surgimento de uma banda colorida rosa-clara. Na ausência dos antígenos de superfície HBsAg não haverá o aparecimento da banda colorida na área T.A mistura da reação continua a fluir atingindo a área controle (C). O conjugado não ligado ao antígeno une-se aos reagentes Imuno-Rápido HbsAg.

AMOSTRAS

Amostras recém-colhidas devem ser utilizadas. Se isto não for possível, devem ser conservadas em geladeira (2-8ºC) por um período máximo de 3 dias, ou freezer (-20ºC). Certificar-se que as amostras tenham atingido a temperatura ambiente antes de utilizá-las. Evitar repetidos congelamentos e descongelamentos, pois isto causará falsos resultados. Se a amostra foi mantida no freezer, ela deverá ser descongeladas e homogeneizada completamente, mantendo-a, posteriormente, em posição vertical para permitir que qualquer partícula que possa existir em suspensão seja sedimentada.Não utilizar amostras de plasma e sangue total, o ânticoagulante utilizado nestas amostras poderá interferir na ação do conjugado, ocorrendo prejuízo na qualidade do teste.

1. Retirar a placa-teste (1) do envelope laminado.

2. Dispensar 100μ
l da amostra na cavidade da amostra da placa-teste(!) .

3. Fazer a leitura dos resultados entre 10 e 20 minutos.

Não considerar resultados lidos após 30 minutos.

Obs.: O Imuno-Rápido HBsAg detecta amostra de soro com concentrações do vírus da hepatite B a partir de 10UI/ml.

CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO

Somente uma banda rosa-clara aparecerá na área do controle (C). Aparecerão duas bandas rosas claras, uma na área teste (T) e outra na área do controle (C). Podem ocorrer diferenças na intensidade entre a banda do teste e a banda controle, mas isto não afeta a interpretação dos resultados. Esta diferença é devido aos níveis de antígeno na amostra do paciente.Se não surgir nenhuma banda visível na área teste (T) e do controle (C), ou se não surgir banda na área do controle. O Imuno-Rápido HBsAg foi comparado com o método Eletroquimioluminescência e os resultados desta comparação, seguem abaixo:

Sensibilidade, Especificidade e Exatidão Clínica. Imuno-Rápido HBsAg identificou corretamente amostras de um painel comercial e foi comparado com um teste de hepatite B do mercado, Eletroquimioluminescência,usando amostras clínicas. Os resultados mostram que a sensibilidade do teste é de 100% e a especificidade é de 99%.

PRECAUÇÕES

1. Somente para uso diagnóstico “in vitro”.

2. Ler cuidadosamente as instruções de uso antes de realizar o teste.

3. A data de validade corresponde ao último dia do mês assinalado na etiqueta do envelope da placa-teste e da caixa do kit.

4. Deve-se evitar expor o kit a temperaturas elevadas, bem como diretamente ao sol.

5. Não congelar a placa-teste, pois isto causará deterioração irreversível.

6. Como se emprega azida sódica a 0,1% como conservante, o descarte dos reativos deve ser acompanhado de grandes volumes de água para evitar acúmulo de resíduos de azida nos encanamentos, pois esta pode reagir com chumbo e cobre formando sais altamente explosivos. Além disso, a azida é tóxica quando ingerida.

7. Deixar os reagentes adquirir a temperatura ambiente antes de iniciar os testes caso estejam refrigerados.

8. Não usar componentes do kit após a data de validade.

9. Utilizar as Boas Praticas de Laboratório (BPLs) na conservação, manuseio e descarte dos materiais.